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赛百纯带你了解蛋白酶K

来源:中国仪器批发网2020-11-25 11:39:22浏览:970

新冠核酸检测试剂盒作为新型冠状病毒检测的“金标准”,蛋白酶K是核酸检测试剂盒中用于检测样本前处理的重要组分,目前市场需求极大。

蛋白酶K(Proteinase K),来源于林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)的蛋白酶K基因,属于丝氨酸蛋白酶类,具有极高的酶活性和广泛的底物特异性。


对于新冠病毒,核酸扩增试验时的处理、抽提、扩增为高风险,因此扩增前需要对标本先行灭活病毒,一般使用新冠核酸试剂盒自带的病毒采样液进行灭活病毒。蛋白酶K(Proteinase K)是病毒采样液的重要组分,病毒采样液有两个作用,一方面作用是直接裂解病毒释放核酸,消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒的RNA降解。另外一方面作用是灭活病毒,让病毒的蛋白变性,失去活性而“死掉”,不再有传染性,提高运输和检测阶段的安全性。因此蛋白酶K(Proteinase K)作为核酸提取试剂盒重要组成成分,在新冠检测中的意义十分重要。

赛百纯为您提供蛋白酶K,核酸提取仪及核酸提取纯化试剂.

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蛋白酶K的运输和储存

      冰袋运输,-20 ℃保存,可以保存12个月。避免反复冻融。

使用方法

      1. 配制蛋白酶K溶液:一般以20mg/ml浓度配制蛋白酶K溶液。将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml dd水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

      2. 根据终浓度50—100µg /ml,吸取适量蛋白酶K溶液,到待消化样品中,孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。

注意事项

           蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的样品处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,能增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号。但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果。

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