毛细管电泳仪常见故障处理方法

　　毛细管电泳又称高效毛细管电泳，是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。毛细管电泳仪的主要部件包括直流高压电源、毛细管、电极和电极槽、冲洗进样系统、检测系统和数据处理系统等。

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　　造成毛细管电泳仪电流不稳定、基线不稳定以及分离效率差以及在毛细管电泳仪的实际应用过程中，迁移时间重现性差和峰面积重现性差，这些原因及解决方法如下：
　　
　　一、电流不稳定
　　
　　波动或无电流
　　
　　可能原因及处理方法：
　　
　　1、毛细管中形成气泡，冲洗毛细管，升高电压以限制初始加热或对缓冲液脱气。
　　
　　2、毛细管堵塞，用吸收溶液(如NaOH)冲洗毛细管，当观察200nm的在线信号时，应该看到基线上有“台阶”，如果仍然堵着，用注射器或高压气体手动冲洗。
　　
　　3、毛细管断裂，更换毛细管
　　
　　4、缓冲液瓶中没有缓冲液或者装错缓冲液，灌装/改变缓冲液瓶。
　　
　　5、大体积进样，正常情况下分析过程中电流应该保持稳定。
　　
　　二、基线不稳定
　　
　　1、基线有毛刺
　　
　　(1)缓冲液沉淀，采用0.2或0.45μm的滤膜过滤缓冲液。
　　
　　(2)缓冲液中有微小的气泡，用超声波或真空对缓冲液进行脱气。
　　
　　(3)样品沉淀验证样品组分在缓)中液中有足够的溶解度。
　　
　　2、基线噪声大
　　
　　(1)毛细管接口中的狭缝堵塞，用甲醇或水清洗狭缝。
　　
　　(2)氘灯老化，使用DAD测试来测定氘灯的光强度和工作时间，若必要就更换新的氘灯。
　　
　　(3)数据采集速率太高，确定峰宽，需要的话降低采集速率
　　
　　(4)参比波长设置不合适，分析过程中采集1^光谱图，在不影响样品吸收的情况下采用尽可能低的波长，并采用宽的带宽。
　　
　　(5)缓冲液在检测波长有吸收，使用UV吸收最低的缓冲液，如磷酸盐和硼酸盐特别是在低于210nm检测时。
　　
　　3、基线飘移
　　
　　(1)毛细管准直定位不合适，重新在检测器块中安装毛细管卡套。
　　
　　(2)温度未平衡，打开顶盖之后要有10-20分钟的平衡时间。
　　
　　(3)氘灯刚刚开启，开启氘灯后要有15-30分钟的平衡时间。
　　
　　三、分离效率差
　　
　　1、宽色谱峰
　　
　　(1)样品超载，降低样品浓度或进样量。
　　
　　(2)过量的焦耳热，降低电压、缓冲液电导或毛细管内径。
　　
　　2、变形的色谱峰
　　
　　(1)样品和缓冲液的离子淌度不匹配，调节淌度或增大缓冲液和样品的电导差异。
　　
　　(2)样品超载，降低样品浓度或进样量。
　　
　　3、峰拖尾
　　
　　样品吸附到毛细管壁，使用聚合物添加剂或涂层毛细管。
　　
　　四、迁移时间重现性差
　　
　　1、样品吸附到毛细管壁
　　
　　缓冲液导致的EOF变化(特别是磷酸盐和表面活性剂)或样品吸附，老化毛细管并要有足够的平衡时间，更换毛细管。
　　
　　2、管壁电荷滞后
　　
　　在高(或低)的PH条件下老化毛细管和使用低(或高)PH运行缓冲液引起，避免PH差异且要有足够的平衡时间。
　　
　　3、缓冲液组分变化
　　
　　(1)电解导致的PH变化，更新缓冲液。
　　
　　(2)缓冲液挥发，扣紧缓冲液瓶盖和降低样品盘温度。
　　
　　(3)再生溶液废液流进了出口缓冲液，使用单独的样品瓶收集废液。
　　
　　(4)再生溶液遗留在缓中液瓶中，先将毛细管插入单独的缓)中液瓶或水瓶中。
　　
　　4、缓冲液瓶液面不一致
　　
　　生成层流，使缓冲液瓶液面一致。如果不更新缓冲液，就不要使用入口瓶冲洗毛细管。
　　
　　5、不同批次毛细管的硅羟基含量不同
　　
　　内壁电荷差异和EOF波动，测定EOF并归一化。
　　
　　6、温度变化
　　
　　粘度和EOF变化，使用可控温的毛细管的系统。
　　
　　五、峰面积重现性差
　　
　　1、样品记忆效应
　　
　　外部进样，使用进样端平整光滑的毛细管除去毛细管端口外面的聚酰亚胺涂层
　　
　　2、简单地将毛细管伸进样品中引起的零进样
　　
　　外部进样，不能完全消除，增大进样量以消除该效应。
　　
　　3、样品吸附到毛细管壁
　　
　　峰形变差(拖尾)未洗脱样品，改变缓冲液的PH，增大缓冲液浓度使用添加剂比如纤维素或者涂层毛细管。
　　
　　4、信噪比低
　　
　　积分误差，优化积分参数，增大样品浓度，使用峰高。
　　
　　5、毛细管环境的温度变化
　　
　　粘度和进样量的变化，使用可控温的毛细管的系统。