您好,欢迎来到中国仪器批发网 | 免费注册

毛细管电泳仪常见故障处理方法

来源:中国仪器批发网2020-08-11 10:08:42浏览:951

  毛细管电泳又称高效毛细管电泳,是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。毛细管电泳仪的主要部件包括直流高压电源、毛细管、电极和电极槽、冲洗进样系统、检测系统和数据处理系统等。

韦克斯电泳,免费试用,体验热线:020-87560209,13066324063

  
  造成毛细管电泳仪电流不稳定、基线不稳定以及分离效率差以及在毛细管电泳仪的实际应用过程中,迁移时间重现性差和峰面积重现性差,这些原因及解决方法如下:
  
  一、电流不稳定
  
  波动或无电流
  
  可能原因及处理方法:
  
  1、毛细管中形成气泡,冲洗毛细管,升高电压以限制初始加热或对缓冲液脱气。
  
  2、毛细管堵塞,用吸收溶液(如NaOH)冲洗毛细管,当观察200nm的在线信号时,应该看到基线上有“台阶”,如果仍然堵着,用注射器或高压气体手动冲洗。
  
  3、毛细管断裂,更换毛细管
  
  4、缓冲液瓶中没有缓冲液或者装错缓冲液,灌装/改变缓冲液瓶。
  
  5、大体积进样,正常情况下分析过程中电流应该保持稳定。
  
  二、基线不稳定
  
  1、基线有毛刺
  
  (1)缓冲液沉淀,采用0.2或0.45μm的滤膜过滤缓冲液。
  
  (2)缓冲液中有微小的气泡,用超声波或真空对缓冲液进行脱气。
  
  (3)样品沉淀验证样品组分在缓)中液中有足够的溶解度。
  
  2、基线噪声大
  
  (1)毛细管接口中的狭缝堵塞,用甲醇或水清洗狭缝。
  
  (2)氘灯老化,使用DAD测试来测定氘灯的光强度和工作时间,若必要就更换新的氘灯。
  
  (3)数据采集速率太高,确定峰宽,需要的话降低采集速率
  
  (4)参比波长设置不合适,分析过程中采集1^光谱图,在不影响样品吸收的情况下采用尽可能低的波长,并采用宽的带宽。
  
  (5)缓冲液在检测波长有吸收,使用UV吸收最低的缓冲液,如磷酸盐和硼酸盐特别是在低于210nm检测时。
  
  3、基线飘移
  
  (1)毛细管准直定位不合适,重新在检测器块中安装毛细管卡套。
  
  (2)温度未平衡,打开顶盖之后要有10-20分钟的平衡时间。
  
  (3)氘灯刚刚开启,开启氘灯后要有15-30分钟的平衡时间。
  
  三、分离效率差
  
  1、宽色谱峰
  
  (1)样品超载,降低样品浓度或进样量。
  
  (2)过量的焦耳热,降低电压、缓冲液电导或毛细管内径。
  
  2、变形的色谱峰
  
  (1)样品和缓冲液的离子淌度不匹配,调节淌度或增大缓冲液和样品的电导差异。
  
  (2)样品超载,降低样品浓度或进样量。
  
  3、峰拖尾
  
  样品吸附到毛细管壁,使用聚合物添加剂或涂层毛细管。
  
  四、迁移时间重现性差
  
  1、样品吸附到毛细管壁
  
  缓冲液导致的EOF变化(特别是磷酸盐和表面活性剂)或样品吸附,老化毛细管并要有足够的平衡时间,更换毛细管。
  
  2、管壁电荷滞后
  
  在高(或低)的PH条件下老化毛细管和使用低(或高)PH运行缓冲液引起,避免PH差异且要有足够的平衡时间。
  
  3、缓冲液组分变化
  
  (1)电解导致的PH变化,更新缓冲液。
  
  (2)缓冲液挥发,扣紧缓冲液瓶盖和降低样品盘温度。
  
  (3)再生溶液废液流进了出口缓冲液,使用单独的样品瓶收集废液。
  
  (4)再生溶液遗留在缓中液瓶中,先将毛细管插入单独的缓)中液瓶或水瓶中。
  
  4、缓冲液瓶液面不一致
  
  生成层流,使缓冲液瓶液面一致。如果不更新缓冲液,就不要使用入口瓶冲洗毛细管。
  
  5、不同批次毛细管的硅羟基含量不同
  
  内壁电荷差异和EOF波动,测定EOF并归一化。
  
  6、温度变化
  
  粘度和EOF变化,使用可控温的毛细管的系统。
  
  五、峰面积重现性差
  
  1、样品记忆效应
  
  外部进样,使用进样端平整光滑的毛细管除去毛细管端口外面的聚酰亚胺涂层
  
  2、简单地将毛细管伸进样品中引起的零进样
  
  外部进样,不能完全消除,增大进样量以消除该效应。
  
  3、样品吸附到毛细管壁
  
  峰形变差(拖尾)未洗脱样品,改变缓冲液的PH,增大缓冲液浓度使用添加剂比如纤维素或者涂层毛细管。
  
  4、信噪比低
  
  积分误差,优化积分参数,增大样品浓度,使用峰高。
  
  5、毛细管环境的温度变化
  
  粘度和进样量的变化,使用可控温的毛细管的系统。

相关文章