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各类PCR检测方式之核酸提取篇

来源:中国仪器批发网2019-12-02 14:07:43浏览:780

      选择一款合适的PCR对于宠物的诊断尤为重要


  以PCR技术为代表的分子诊断因其高灵敏性和高特异性等不可替代的优势,成为作为兽医实验室诊断的趋势和制高点。在临床工作中,PCR技术需要系统的培训和标准的操作流程,包括:样本前处理核酸提取和纯化PCR扩增和结果分析等

  
  就样本处理方式而言有核酸免提取的、有化学裂解法手动核酸提取的、有离心柱法核酸提取的、有磁珠法核酸提取的;让兽医师们无从选择,到底应该怎样客观的看待这些,做到科学的选择呢,接下来会就PCR样本处理方式的不同方法做详细的阐述
  
  核酸提取和纯化是PCR检测的关键环节
  
  核酸提取是分子诊断实验十分重要的环节,因为首先必须把宠物样品中的核酸提取出来,才能进行后续的检测。
  
  核酸提取具有两大目的
  
  √  提纯(消除样本中干扰物质)
  
  √  浓缩(提高样本中核酸浓度)
  

  目前核酸提取和纯化的四种方式:

  
  PCR所检测样品(血清、全血、细胞保存液和粪便等)中有很多干扰物和抑制物,核酸含量低,直接检测核酸难度高,灵敏度差。因此检测之前,需要将样品中的核酸裂解,提纯并浓缩,也就是核酸提取。这是业界的主流做法。
  
  比如临床上一些鼻咽拭子和口腔拭子的洗脱液,成分很简单,可以不进行核酸提取,但如果不经过浓缩纯化,会降低检测的灵敏度。而复杂样本必须要进行核酸提取
  
  手动核酸提取操作繁琐并易导致样本被污染
  
  传统化学裂解法核酸提取
  
  所包含的沉淀和离心等操作,需要用到大量的生物样本,缺点是:
  
  √ 操作复杂、耗时长;
  
  √ 核酸收率低,易导致假阴性;
  
  √ 含化学有毒试剂
  
  离心柱法
  
  曾经应用很普及,较传统化学裂解法,离心柱法提高了核酸提取的效率,同时使用相对无毒的试剂,更为安全,但是
  
  √ 需要反复离心,不便于高通量、自动化操作
  
  √ 人工操作反复开盖加入或倒出试剂,易导致人为和气溶胶污染
  
  √ 相比磁珠法样本需求量大
  
  全自动封闭式磁珠法核酸提取是大势所趋
  
  为了适应现代分子生物学检测实验高通量、高敏感性、自动化操作的需要,运用磁珠自动提取核酸的方法应运而生了,该方法是纳米科技与生物技术的完美结合,具有其他核酸提取方法无法比拟的优势,主要体现在:
  
  √  核酸提取效率高:磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大;操作简单、用时短,可以在30min内完成。
  
  √ 全封闭自动化操作避免污染,确保结果稳定:能够实现封闭式和自动化操作,降低人工操作可能带来的人为和空气污染;磁珠提取核酸的方法采用智能化软件操作系统确保结果稳定性,避免人工操作引起的差异及错误。
  

  √  安全无毒:不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒溶剂,对实验操作人员没有伤害,符合现代以人为本,安全至上的理念。


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