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不同定量方法蛋白浓度实测对比

来源:中国仪器批发网2019-12-16 11:03:11浏览:1327

紫外吸收A280法是利用蛋白中色氨酸和酪氨酸残基在紫外280nm波长处有特征性的吸收峰,并且其光吸收值与蛋白质浓度呈正比来测定蛋白质含量。

然而对于杂蛋白来说,溶液组成复杂,溶液中蛋白吸光系数不同,除此之外溶液中的核酸也会影响蛋白检测的结果,因而当蛋白溶液不纯时,利用比色法进行蛋白定量将是您实验的更佳选择。


一、实验方法 


配置一系列浓度BSA蛋白标品,并用紫外吸收法A280与比色法分别检测BSA标品蛋白浓度。


二、检测方法 


2.1 紫外吸收法A280定量蛋白浓度(奥盛Nano-500微量分光光度计
2.2 BCA法定量蛋白浓度(奥盛Nano-500)2.3 BCA法定量蛋白浓度(奥盛FlexA-200全波长酶标仪


三、检测结果 


3.1 Nano-500的标准曲线建立

Nano-500微量分光光度计的比色法检测功能仅需2ul的上样量,仪器便可自动拟合出相应的曲线方程,并可导出保存,方便下次使用。


图1.Nano-500的BCA标准曲线



3.2 FlexA-200的标准曲线建立全波长酶标仪FlexA-200的下位机软件可直接进行各种算法的运算,无需连接电脑便可直接对检测数据进行处理分析。标准曲线功能可对标准品直接进行线性拟合,并提供拟合方程,也可通过显示未知样品功能对未知样品的浓度进行即时查看(如图2右)。

图2.FlexA-200的BCA标准曲线


3.3 不同检测方法的蛋白定量结果

由表1可以看出,当检测标品BSA纯蛋白时,紫外A280法与比色法的检测浓度基本无差异。


表1.不同检测方法的蛋白定量结果


综上所述,对于蛋白质标准品而言,A280法和比色法浓度检测结果无明显差异,但若是试剂提取的总蛋白时,结果又会如何呢?详细结果我们将在下次的文章中带来。


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