您好,欢迎来到中国仪器批发网 | 免费注册

如何判断自己的PCR仪器荧光检测是否正常?

来源:中国仪器批发网2019-12-11 13:30:12浏览:932

基因扩增仪(PCR) 常见问题!

PCR仪器的热盖坏了怎么办?

荧光定量PCR仪的热盖失效或故障最主要的表现是:控温不准和液体挥发,反应液挥发会最终导致曲线不扩增,呈斜线上升。首先可通过曲线判断热盖是否故障,若确定热盖已经坏了,建议可以在每个PCR反应管中加入一层矿物油(矿物油可避免反应液挥发),上机测试曲线结果是否正常。如曲线仍然异常,则建议请仪器工程师现场维修,甚至直接更换热盖。

PCR仪器运行中突然断电怎么办?
常我们建议在实验室配备UPS电源,这样能够保证PCR仪器运行过程中的正常供电,从而保证程序的正常运行。PCR仪器在运行中突然断电的话,如仪器有断电保护功能,则可直接继续运行程序。如实验室无UPS电源,突然断电而导致PCR程序不能完成,为了保证实验结果的真实性,建议只能重复实验再上机检测。

如何判断自己的PCR仪器荧光检测是否正常?
要判断自己的PCR仪器是否正常,可从以下几方面考虑:
1.    仪器开关机,与软件连接是否正常。
2.    仪器运行同样的实验所需要的时间是否跟平时一致,由此判断仪器的加热制冷模块是否正常。
3.    曲线结果是否呈明显的S型,若曲线异常,如呈曲折上升状,则可能是热盖问题,或者是荧光检测装置出现问题。
4.    若曲线的荧光值与平时相比,明显降低,则要考虑是否需要更换仪器光源(尤其是卤素灯,其光源寿命约2000h)。

5.    若仪器某一孔或几孔的荧光值明显高于其他孔位,则需要考虑仪器的孔槽或检测光路是否受到荧光污染,建议清洗仪器孔槽后再进行测试。

实验室扩增产物污染怎么办?
如实验室的扩增产物泄露,造成实验室的污染,那么后果将非常严重。要去除污染,首先最重要的是保持通风,保证扩增产物片段能顺利扩散出去;其次可采用稀酸处理法,对可疑器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡,使残余DNA脱嘌呤;再次采用紫外照射法,紫外波长(nm)一般选择254/300nm,需要注意的是,选择UV作为消除残留PCR产物污染时,要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布,UV照射仅对500bp以上长片段有效,对短片段效果不大;最后若污染长时间不能消除,建议更换另外厂家的PCR试剂进行检测,因为每个厂家的引物设计区域不一样;一般情况下,一家试剂公司的扩增产物不会在另外一家厂家的引物设计区域内,因此不会造成产物污染的假阳性。

“假阴性”与“假阳性”结果如何判定?

假阴性判断:造成假阴性结果的原因有很多,主要体现在FAM扩增曲线不起来,原因包括标本抑制,核酸提取失败,基因突变以及仪器故障等。


目前国内主流PCR试剂都不带内标监控功能,用于检测目标基因的FAM扩增曲线既用来定量又用于定性(判断阴阳性),因此FAM扩增曲线的好坏非常关键。对于此类无内标试剂,建议结合乙肝血清标志物结果(五项定量/定性结果)来判断阴阳性,即使是FAM曲线有扩增也应该参考此结果,特别是E抗原结果。同时,对于拥有竞争性内标监控功能的试剂来说,可有以下四种情况发生:如FAM无扩增,内标有扩增:结果正常,判断该样本为阴性结果;如FAM无扩增,内标也无扩增:结果异常,可能原因核酸提取失败或有抑制,一定要重复实验;如FAM有扩增,内标有扩增:结果正常,因为待测核酸和内标在同一反应体系下扩增;如FAM有扩增,内标无扩增:结果正常,强阳性样本会抑制内标的扩增,导致内标结果偏弱或阴性。

假阳性判断(如何判定):临床PCR检测当中造成假阳性结果的情况比较少,原因包括试剂污染,气溶胶污染,操作污染,扩增产物污染,非特异性扩增,耗材污染等,所以建议一定要做阴性对照来监控是否存在污染。

精品PCR仪,就选朗基

朗基,pcr仪卓越制造商!


pcr仪试用热线:13066324063

相关文章