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基因扩增仪(PCR) 常见问题！
PCR仪器的热盖坏了怎么办？
荧光定量PCR仪的热盖失效或故障最主要的表现是：控温不准和液体挥发，反应液挥发会最终导致曲线不扩增，呈斜线上升。首先可通过曲线判断热盖是否故障，若确定热盖已经坏了，建议可以在每个PCR反应管中加入一层矿物油（矿物油可避免反应液挥发），上机测试曲线结果是否正常。如曲线仍然异常，则建议请仪器工程师现场维修，甚至直接更换热盖。PCR仪器运行中突然断电怎么办？
常我们建议在实验室配备UPS电源，这样能够保证PCR仪器运行过程中的正常供电，从而保证程序的正常运行。PCR仪器在运行中突然断电的话，如仪器有断电保护功能，则可直接继续运行程序。如实验室无UPS电源，突然断电而导致PCR程序不能完成，为了保证实验结果的真实性，建议只能重复实验再上机检测。
如何判断自己的PCR仪器荧光检测是否正常？
要判断自己的PCR仪器是否正常，可从以下几方面考虑：
1. 仪器开关机，与软件连接是否正常。
2. 仪器运行同样的实验所需要的时间是否跟平时一致，由此判断仪器的加热制冷模块是否正常。
3. 曲线结果是否呈明显的S型，若曲线异常，如呈曲折上升状，则可能是热盖问题，或者是荧光检测装置出现问题。
4. 若曲线的荧光值与平时相比，明显降低，则要考虑是否需要更换仪器光源（尤其是卤素灯，其光源寿命约2000h）。
5.
若仪器某一孔或几孔的荧光值明显高于其他孔位，则需要考虑仪器的孔槽或检测光路是否受到荧光污染，建议清洗仪器孔槽后再进行测试。
实验室扩增产物污染怎么办？
如实验室的扩增产物泄露，造成实验室的污染，那么后果将非常严重。要去除污染，首先最重要的是保持通风，保证扩增产物片段能顺利扩散出去；其次可采用稀酸处理法，对可疑器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡，使残余DNA脱嘌呤；再次采用紫外照射法，紫外波长（nm）一般选择254/300nm，需要注意的是，选择UV作为消除残留PCR产物污染时，要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布，UV照射仅对500bp以上长片段有效，对短片段效果不大；最后若污染长时间不能消除，建议更换另外厂家的PCR试剂进行检测，因为每个厂家的引物设计区域不一样；一般情况下，一家试剂公司的扩增产物不会在另外一家厂家的引物设计区域内，因此不会造成产物污染的假阳性。
“假阴性”与“假阳性”结果如何判定？
假阴性判断：造成假阴性结果的原因有很多，主要体现在FAM扩增曲线不起来，原因包括标本抑制，核酸提取失败，基因突变以及仪器故障等。
目前国内主流PCR试剂都不带内标监控功能，用于检测目标基因的FAM扩增曲线既用来定量又用于定性（判断阴阳性），因此FAM扩增曲线的好坏非常关键。对于此类无内标试剂，建议结合乙肝血清标志物结果（五项定量/定性结果）来判断阴阳性，即使是FAM曲线有扩增也应该参考此结果，特别是E抗原结果。同时，对于拥有竞争性内标监控功能的试剂来说，可有以下四种情况发生：如FAM无扩增，内标有扩增：结果正常，判断该样本为阴性结果；如FAM无扩增，内标也无扩增：结果异常，可能原因核酸提取失败或有抑制，一定要重复实验；如FAM有扩增，内标有扩增：结果正常，因为待测核酸和内标在同一反应体系下扩增；如FAM有扩增，内标无扩增：结果正常，强阳性样本会抑制内标的扩增，导致内标结果偏弱或阴性。
假阳性判断（如何判定）：临床PCR检测当中造成假阳性结果的情况比较少，原因包括试剂污染，气溶胶污染，操作污染，扩增产物污染，非特异性扩增，耗材污染等，所以建议一定要做阴性对照来监控是否存在污染。
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