PCR仪操作与维护

　　简单的说，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。
　　

　　目前，常用的技术，可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准，可以将PCR仪分为普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类。

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　　实验操作注意事项：
　　
　　尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：
　　
　　1.戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套；
　　
　　2.使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；
　　
　　3.避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；
　　
　　4.操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度；
　　
　　5.最后加入反应模板，加入后盖紧反应管；
　　
　　6.操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性；
　　
　　7.尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，最好使用可替换或高压处理的加样器。
　　
　　如没有这种特殊的加样器，至少PCR操作过程中加样器应该专用，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区；
　　
　　8.重复实验，验证结果，慎下结论。
　　
　　实验室使用的基因扩增仪，荧光定量PCR仪都是高精度仪器。一旦仪器出现一些温度或者检测上的小偏差，则很可能对实验结果产生较大的影响。因此，学会日常保养和维护是尤为重要的。
　　
　　1、仪器安置
　　
　　仪器应安放在湿度较低、灰尘较少并远离水源和热源的地方，无腐蚀性气体或强磁场干扰。
　　
　　环境温度建议在18~35℃之间。仪器之间应保持50cm 以上距离，降低仪器之间的影响。
　　
　　2、样品台、热盖定期清洁
　　
　　用95%乙醇配合棉签、无尘布等工具，清洁样品台。之后运行PCR仪，设定保持温度为50℃，约5~10min，让残余液体挥发去除。
　　
　　另外，热盖也应该用酒精或纯水定期清洗，确保热盖清洁，温控性能良好。对于荧光定量PCR，清洁样品台和热盖的同时，去除灰尘等杂物，保证光路清洁，降低信号干扰。
　　
　　3. 使用前预热
　　
　　老款的PCR仪的性能比不上新款仪器，使用前需要进行预热，不仅对仪器维护有好处，还能节约实验时间。新款的仪器升温快，但还是建议最好能在进行实验前预热2min，这样可以有效延长仪器的使用寿命。
　　
　　4. 定期运行维护
　　
　　1.PCR仪器需要定期检测，视制冷方式而定一般半年至少一次。
　　
　　2.PCR反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的，当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于1～2℃时，可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差。
　　
　　3.PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制，要求越短越好，当PCR仪的降温过程超过60s，就应该检查仪器的制冷系统，对风冷制冷的PCR仪要较彻底地清理反应底座的灰尘；对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。
　　
　　4.一般情况如能采用温度修正法纠正仪器的温度时，不要轻易打开或调整仪器的电子控制部件，必要时要请专业人员修理或利用仪器电子线路详细图纸进行维修。
　　
　　其他注意事项
　　
　　另外，由于生产厂家和仪器型号的不同，仪器在保养上也会有差异，有些荧光定量PCR仪，采用底部检测的模式，平时使用仪器附件中的橡胶风球吹去样品台上的灰尘等。必要的时候，可以用棉签沾取无水酒精清洁，但需要注意不要把液体滴入检测孔中，防止影响里面的光路部件。