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奥盛AMR-100酶标仪有哪些应用

来源:中国仪器批发网2019-09-23 14:20:04浏览:712

奥盛AMR-100酶标仪


一、蛋白质浓度测定
可见光吸收法
  1.1 Lowry法
  1.2 考马斯亮蓝法(Bradford)
  1.3 BCA法

方法

灵敏度

原理

应用

检测波长

改良的Lowry法

灵敏度高

TCA沉淀后的蛋白定量

750nm 

考马斯亮蓝法

灵敏度高

考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时,其最大吸收峰由465nm变为595nm,改良法降低了不同蛋白质与染料结合后的颜色差异

蛋白质快速定量(可耐受大多数的还原剂如BME、DTT等)

595nm

BCA法

灵敏度高

在碱性溶液中,蛋白质将二价铜(CU2+)还原成一价铜(CU+)后者与测定试剂中BCA(金鸡宁)生成一个在562nm处具有最大光吸收的紫色复合物

蛋白质定量,尤其是膜蛋白定量(可耐受大多数的变性剂如SDS,TritionX-100等;不能耐受还原剂如DTT,BME,葡萄糖,抗坏血酸等)

562nm

二、细胞增殖及细胞毒性检测
可见光吸收法
2.1 终点法
工作原理:
 2.1.1 死细胞计数
    -- 染料法:
     细胞死亡后,细胞膜通透性增高,染料可以透过。
     染料:台盼蓝,Cytorecon,PI等。
    -- 比色法:
     细胞死亡后,胞内物质释放,可在培养基中检出。
     检测对象:51Cr,LDH等
 2.1.2 活细胞计数
    -- 染料法:
     活细胞的线粒体酶可以还原染料,产生有色产物。 
     染料:四氮唑盐类(MTT,XTT,WST-1,CCK8/WST-8)等
     检测波长:450nm(XTT,WST-1,CCK8/WST-8),490nm或570nm(MTT)
     参比波长:690nm
2.2 动力学法 
 2.2.1 动态监测细胞增殖和细胞毒性)
     工作原理: 
     -- 细胞增殖过程中,细胞体内的环境由氧化环境变化成还原环境,呼吸链中的NADPH/NADP, 
       FADH/FAD,FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高。
     -- AlamarBlue被细胞内吞后,在细胞质中被上述代谢中间体还原,最后释放到胞外。
     -- 被还原AlamarBlue的积累使培养基从无荧光的靛青蓝转变成有荧光的粉红色。
     检测波长:570nm
     参比波长:600nm

三、细胞凋亡检测检测
工作原理:
-- 细胞凋亡的发生是由于钙-镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA,产生180~200bp或其数倍的
  核小体片段,而核小体由于与组蛋白形成紧密复合物而不被核酸内切酶切割。
-- 应用小鼠抗DNA和抗组蛋白的单克隆抗体,与核小体片段形成夹心结构,可特异性检测细胞溶  
  解物中的核小体片段。
检测方法: 
-- 在微定量板上吸附抗组蛋白抗体,加入细胞裂解后离心所得的含有核小体的上清液,核小体上
  的组蛋白与包被的抗组蛋白抗体结合;
-- 加入辣根过氧化物酶标记的抗DNA抗体,与核小体上的DNA结合;
-- 加酶的底物,测光吸收值。
检测波长:405nm和492nm

四、报告基因检测
五、信号转导检测
六、活性小分子检测
七、内毒素检测
八、过敏原检测
九、其他酶类检测

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