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一、蛋白质浓度测定
可见光吸收法
1.1 Lowry法
1.2 考马斯亮蓝法（Bradford）
1.3 BCA法
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方法 |
灵敏度 |
原理 |
应用 |
检测波长 |
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改良的Lowry法 |
灵敏度高 |
TCA沉淀后的蛋白定量 |
750nm |
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考马斯亮蓝法 |
灵敏度高 |
考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其最大吸收峰由465nm变为595nm，改良法降低了不同蛋白质与染料结合后的颜色差异 |
蛋白质快速定量（可耐受大多数的还原剂如BME、DTT等） |
595nm |
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BCA法 |
灵敏度高 |
在碱性溶液中,蛋白质将二价铜(CU2+)还原成一价铜(CU+)后者与测定试剂中BCA（金鸡宁）生成一个在562nm处具有最大光吸收的紫色复合物 |
蛋白质定量，尤其是膜蛋白定量(可耐受大多数的变性剂如SDS，TritionX-100等；不能耐受还原剂如DTT，BME，葡萄糖，抗坏血酸等) |
562nm |
二、细胞增殖及细胞毒性检测
可见光吸收法
2.1 终点法
工作原理：
2.1.1 死细胞计数
-- 染料法：
细胞死亡后，细胞膜通透性增高，染料可以透过。
染料：台盼蓝，Cytorecon，PI等。
-- 比色法：
细胞死亡后，胞内物质释放，可在培养基中检出。
检测对象：51Cr，LDH等
2.1.2 活细胞计数
-- 染料法：
活细胞的线粒体酶可以还原染料，产生有色产物。
染料：四氮唑盐类（MTT，XTT，WST-1，CCK8/WST-8）等
检测波长：450nm（XTT，WST-1，CCK8/WST-8），490nm或570nm（MTT）
参比波长：690nm
2.2 动力学法
2.2.1 动态监测细胞增殖和细胞毒性)
工作原理：
-- 细胞增殖过程中，细胞体内的环境由氧化环境变化成还原环境，呼吸链中的NADPH/NADP,
FADH/FAD,FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高。
-- AlamarBlue被细胞内吞后，在细胞质中被上述代谢中间体还原，最后释放到胞外。
-- 被还原AlamarBlue的积累使培养基从无荧光的靛青蓝转变成有荧光的粉红色。
检测波长：570nm
参比波长：600nm
三、细胞凋亡检测检测
工作原理：
-- 细胞凋亡的发生是由于钙-镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA，产生180~200bp或其数倍的
核小体片段，而核小体由于与组蛋白形成紧密复合物而不被核酸内切酶切割。
-- 应用小鼠抗DNA和抗组蛋白的单克隆抗体，与核小体片段形成夹心结构，可特异性检测细胞溶
解物中的核小体片段。
检测方法：
-- 在微定量板上吸附抗组蛋白抗体，加入细胞裂解后离心所得的含有核小体的上清液，核小体上
的组蛋白与包被的抗组蛋白抗体结合；
-- 加入辣根过氧化物酶标记的抗DNA抗体，与核小体上的DNA结合；
-- 加酶的底物，测光吸收值。
检测波长：405nm和492nm
四、报告基因检测
五、信号转导检测
六、活性小分子检测
七、内毒素检测
八、过敏原检测
九、其他酶类检测
