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ELISA实验前期准备注意事项

来源:中国仪器批发网2019-01-07 09:44:58浏览:699

ELISA是免疫学检测、诊断研究最常用的方法之一,用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清(浆),有时因为特定的检测目的,也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。ELISA的试剂盒也多种多样,一般只要严格遵照试剂盒所附说明书操作,均能得到理想的结果。ELISA实验操作中注意事项总结如下

 

 1.样本准备

 在采集血样和分离血清的过程中应尽可能避免溶血。因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。

 分离血清时最好在室温或者37℃水浴中凝固,而不要放在冰箱凝固。ELISA血清样本要求新鲜,如果要贮藏后再检测,应分装在-20℃以下,避免反复冻融。反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存,从而引起假阴性结果。此外,冻融标本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。

 

 2.试剂准备

 在临床实验室,对试剂准备一般不太注意,通常的做法是,在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是,在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20分钟以上后,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。并要注意不同厂家的试剂不能混用。

 其次,目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制,因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。

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