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荧光定量PCR在唐氏综合征产前诊断中的应用

来源:中国仪器批发网2018-07-09 10:26:08浏览:618
  受孕年龄满34岁的妇女、生产时已满35岁者,可称之为高龄产妇。高龄产妇不但孕期风险大,而且随着年龄增大,卵子易过最佳“保质期”,造成质量下降、受精时染色体异常几率变高等问题,导致胎儿致畸率增高。唐氏综合征即21-三体综合征,又称先天愚型或Down综合征(简称DS),即是由染色体异常(多了一条21号染色体)而导致的疾病,60%患儿在胎内早期即流产,存活者有明显的智能落后、特殊面容、生长发育障碍和多发畸形。。唐氏病儿随母亲年龄增大而发病率增高,母亲年龄在35岁者,子女的发病率为1/300,40~45岁为1/100,45岁以上为1/50。
  
  在我国每年约有2万多例唐氏综合征患儿出生,本病目前尚无有效的根治方法,给患者家庭和社会造成了很大的经济负担,因此做好唐氏综合征产前诊断,具有重大的经济和社会价值。
  
  国内目前DS产前诊断的金标准为染色体核型分析法,,但是其操作繁琐,检验周期长(各医院不同,有的需一个月左右),对技术人员核型分析能力依赖性大。 荧光原位杂交( FISH) 检测DS 患儿虽然快速,但价格较高,且实验环节影响因素较多。全基因组拷贝数分析法可以对全基因组拷贝数变异进行分析,但是该方法依赖公司芯片及大型分析设备,成本高,操作复杂,数据信息量大以致分析相对复杂,不能检出嵌合型和异位型DS。
  
  除上述方法外,细胞遗传学和分子遗传学的学者们正在研究采用多重QS-PCR方法进行唐氏综合征产前诊断分析。对21 号染色体上多个短串联重复序列( STR) 位点进行多重QF-PCR扩增,PCR 产物进行毛细管电泳,用GeneMapper 软件对STR DNA 进行多态性分型,每个STR 基因座检测出现约1∶ 1∶ 1等比例峰或2∶ 1( 或1∶ 2) 峰为相应染色体的三倍体,即为DS阳性。同时对患儿外周血进行淋巴细胞培养和染色体核型分析,多重QS-PCR方法与染色体核型分析法所得结果基本一致。
  
  用多重QF-PCR 检测DS 患儿成本大幅降低,且准确快速(一天可出结果,减少患者等待的焦虑痛苦),可高通量检测,判读标准客观,不仅可用于脐血、还可以用于羊水中胎儿脱落细胞和绒毛组织等标本的快速检测。与染色体核型分析联用,起到有效的互补作用,具有较高的临床应用和推广价值。
  
  值得注意的是,有研究报告显示单个STR 检测的阳性率为17% ~ 83%,4 个STR 组合的阳性检出率达到100%,因此选取的STR 基因座数量和其遗传效能、突变概率等直接影响到结果的准确性。另外,嵌合体样本其嵌合比例大小(多数学者认为对于嵌合体的检测,QF-PCR 一般可检出嵌合比例大于10%的样本),也将影响扩增的效果,可能产生漏检。
  
  因此QF-PCR 法应用于产前诊断如何避免假阳性和漏检还需进一步研究探讨,建议制定规范化流程和标准,争取早日进入临床应用。

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