荧光定量PCR在唐氏综合征产前诊断中的应用

　　受孕年龄满34岁的妇女、生产时已满35岁者，可称之为高龄产妇。高龄产妇不但孕期风险大，而且随着年龄增大，卵子易过最佳“保质期”，造成质量下降、受精时染色体异常几率变高等问题，导致胎儿致畸率增高。唐氏综合征即21-三体综合征，又称先天愚型或Down综合征（简称DS），即是由染色体异常（多了一条21号染色体）而导致的疾病，60%患儿在胎内早期即流产，存活者有明显的智能落后、特殊面容、生长发育障碍和多发畸形。。唐氏病儿随母亲年龄增大而发病率增高，母亲年龄在35岁者，子女的发病率为1/300，40～45岁为1/100，45岁以上为1/50。
　　
　　在我国每年约有2万多例唐氏综合征患儿出生，本病目前尚无有效的根治方法，给患者家庭和社会造成了很大的经济负担，因此做好唐氏综合征产前诊断，具有重大的经济和社会价值。
　　
　　国内目前DS产前诊断的金标准为染色体核型分析法，，但是其操作繁琐，检验周期长（各医院不同，有的需一个月左右），对技术人员核型分析能力依赖性大。 荧光原位杂交( FISH) 检测DS 患儿虽然快速，但价格较高，且实验环节影响因素较多。全基因组拷贝数分析法可以对全基因组拷贝数变异进行分析，但是该方法依赖公司芯片及大型分析设备，成本高，操作复杂，数据信息量大以致分析相对复杂，不能检出嵌合型和异位型DS。
　　
　　除上述方法外，细胞遗传学和分子遗传学的学者们正在研究采用多重QS-PCR方法进行唐氏综合征产前诊断分析。对21 号染色体上多个短串联重复序列( STR) 位点进行多重QF-PCR扩增，PCR 产物进行毛细管电泳，用GeneMapper 软件对STR DNA 进行多态性分型，每个STR 基因座检测出现约1∶ 1∶ 1等比例峰或2∶ 1( 或1∶ 2) 峰为相应染色体的三倍体，即为DS阳性。同时对患儿外周血进行淋巴细胞培养和染色体核型分析，多重QS-PCR方法与染色体核型分析法所得结果基本一致。
　　
　　用多重QF-PCR 检测DS 患儿成本大幅降低，且准确快速（一天可出结果，减少患者等待的焦虑痛苦），可高通量检测，判读标准客观，不仅可用于脐血、还可以用于羊水中胎儿脱落细胞和绒毛组织等标本的快速检测。与染色体核型分析联用，起到有效的互补作用，具有较高的临床应用和推广价值。
　　
　　值得注意的是，有研究报告显示单个STR 检测的阳性率为17% ～ 83%，4 个STR 组合的阳性检出率达到100%，因此选取的STR 基因座数量和其遗传效能、突变概率等直接影响到结果的准确性。另外，嵌合体样本其嵌合比例大小（多数学者认为对于嵌合体的检测，QF-PCR 一般可检出嵌合比例大于10%的样本），也将影响扩增的效果，可能产生漏检。
　　
　　因此QF-PCR 法应用于产前诊断如何避免假阳性和漏检还需进一步研究探讨，建议制定规范化流程和标准，争取早日进入临床应用。