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血液RNA提取试剂盒
以下样本取自某三甲医院,使用271602血液RNA提取试剂盒对样本进行提取,得到的核酸测量浓度、纯度,在跨外显子区域(exon spanning primer&probe)设计引物,对得到的RNA进行反转录和非反转录扩增,计算 △Ct值。
1、提取外周血RNA(样本量1000ul)
样本 |
浓度(ng/ul) |
A260/A280 |
A260/A230 |
转录组 |
不转录组 |
△CT |
1 |
34.65 |
1.96 |
1.12 |
22.043 |
31.957 |
9.914 |
2 |
313.7 |
1.92 |
1.22 |
20.676 |
29.316 |
8.64 |
3 |
53.62 |
1.96 |
1.43 |
21.941 |
29.621 |
7.68 |
4 |
107.1 |
1.96 |
1.38 |
21.059 |
28.879 |
7.82 |
5 |
73.32 |
1.99 |
1.49 |
21.582 |
29.527 |
7.945 |
6 |
41.91 |
1.96 |
1.4 |
23.145 |
30.238 |
7.093 |
本实验中,核酸浓度样本范围为34.65-313.7ng/ul,A260/A280在1.92以上;转录组CT值在20.676-23.145之间,且△CT(不转录组CT-转录组CT)均大于5,说明提取后RNA中残留的基因组DNA较少,所得到的RNA成分纯度高,适用于后续RNA诊断。
2、提取骨髓血样本(细胞含量少)
样本 |
序号 |
浓度(ng/ul) |
A260/A280 |
A260/A230 |
转录组 |
不转录组 |
△CT |
200ul骨髓血 |
1 |
10.59 |
2.01 |
1.06 |
23.887 |
33.348 |
9.461 |
2 |
15.08 |
2 |
1.17 |
24.254 |
32.293 |
8.039 |
|
3 |
18.87 |
2.01 |
1.27 |
24.293 |
31.309 |
7.016 |
|
4 |
39.23 |
1.95 |
1.44 |
23.277 |
30.473 |
7.196 |
|
5 |
152.9 |
1.98 |
1.48 |
22.074 |
27.473 |
5.399 |
|
6 |
86.95 |
1.94 |
1.41 |
22.926 |
28.371 |
5.445 |
|
7 |
26.46 |
1.96 |
1.32 |
24.465 |
29.887 |
5.422 |
|
8 |
32.07 |
1.93 |
1.24 |
23.637 |
29.223 |
5.586 |
|
样本 |
序号 |
浓度(ng/ul) |
A260/A280 |
A260/A230 |
转录组 |
不转录组 |
△CT |
300ul骨髓血 |
1 |
25.77 |
1.98 |
1.22 |
21.285 |
29.629 |
8.344 |
2 |
38.77 |
1.99 |
1.41 |
21.855 |
29.434 |
7.579 |
|
3 |
35.8 |
1.99 |
1.36 |
21.918 |
28.684 |
6.766 |
|
4 |
77.64 |
1.98 |
1.44 |
20.996 |
27.91 |
6.914 |
|
5 |
385.9 |
1.99 |
1.52 |
19.395 |
28.082 |
8.687 |
|
6 |
210.3 |
1.97 |
1.37 |
21.66 |
29.34 |
7.68 |
|
7 |
85.07 |
1.97 |
1.44 |
21.137 |
26.793 |
5.656 |
|
8 |
268.9 |
2.01 |
1.52 |
20.285 |
28.582 |
8.297 |
|
样本 |
序号 |
浓度(ng/ul) |
A260/A280 |
A260/A230 |
转录组 |
不转录组 |
△CT |
400ul骨髓血 |
1 |
32.14 |
1.98 |
1.23 |
21.527 |
31.746 |
10.219 |
2 |
46.92 |
1.99 |
1.39 |
21.863 |
29.902 |
8.039 |
|
3 |
47.88 |
1.96 |
1.36 |
22.012 |
31.012 |
9 |
|
4 |
99.33 |
1.98 |
1.45 |
21.176 |
30.051 |
8.875 |
|
5 |
491.9 |
2 |
1.51 |
19.207 |
29.551 |
10.344 |
|
6 |
298.8 |
1.97 |
1.48 |
20.629 |
29.645 |
9.016 |
|
7 |
113.7 |
1.98 |
1.43 |
21.316 |
28.574 |
7.258 |
|
8 |
289 |
1.98 |
1.49 |
20.262 |
32.355 |
12.093 |
对于骨髓血样本(细胞含量少)做了不同样本加入量的测试,从核酸浓度以及转录组CT值来考虑,300ul骨髓血效果最好,其核酸浓度在25.77-385.9ng/ul之间,A260/A280在1.97以上,RNA质量不错;转录组CT值在19.395-21.918之间,且△CT(不转录组CT-转录组CT)均大于5,说明提取后RNA中残留的基因组DNA较少,所得到的RNA成分纯度高,适用于后续RNA诊断。
3、提取骨髓血样本(细胞含量多)
样本 |
序号 |
浓度(ng/ul) |
A260/A280 |
A260/A230 |
转录组 |
不转录组 |
△CT |
50ul骨髓血 |
1 |
90.38 |
1.97 |
1.5 |
19.918 |
32.996 |
13.078 |
2 |
92.96 |
1.97 |
1.49 |
19.934 |
33.887 |
13.953 |
|
样本 |
序号 |
浓度(ng/ul) |
A260/A280 |
A260/A230 |
转录组 |
不转录组 |
△CT |
100ul骨髓血 |
1 |
153.2 |
1.98 |
1.48 |
19.16 |
29.449 |
10.289 |
2 |
385.3 |
1.98 |
1.55 |
19.223 |
23.902 |
4.679 |
|
样本 |
序号 |
浓度(ng/ul) |
A260/A280 |
A260/A230 |
转录组 |
不转录组 |
△CT |
150ul骨髓血 |
1 |
348 |
1.97 |
1.55 |
19.395 |
26.48 |
7.085 |
2 |
591.3 |
1.99 |
1.53 |
18.84 |
25.551 |
6.711 |
对于骨髓血样本(细胞含量多)做了不同样本加入量的测试,从核酸浓度以及转录组CT值来考虑,50ul骨髓血效果最好,其核酸浓度在90ng/ul左右,A260/A280为1.97,RNA质量不错;转录组CT值在19上下,且△CT(不转录组CT-转录组CT)大于5,说明提取后RNA中残留的基因组DNA较少,所得到的RNA成分纯度高,适用于后续RNA诊断。
4、不同厂家提取外周血、骨髓血样本反转录CT值对比
样本 |
竞品A(离心柱法) |
竞品B(磁珠法) |
赛百纯 |
骨髓血 |
21.47 |
23.13 |
21.41 |
22.71 |
21.80 |
21.32 |
|
外周血 |
22.38 |
22.10 |
21.15 |
22.79 |
22.43 |
21.59 |
①骨髓血样本:赛百纯的 CT 值(21.41、21.32),不仅低于磁珠法竞品 B 的对应值(23.13、21.80),还与离心柱法竞品 A 的最优值(21.47)相当甚至更优;
②外周血样本:赛百纯的 CT 值(21.15、21.59),低于竞品 A(22.38、22.79)和竞品 B(22.10、22.43)。
与市面上主流血液RNA提取试剂盒相比,本公司试剂盒不仅能更高效提取出高质量RNA,经反转录扩增后CT值也显著更靠前,充分体现出提取性能优于其他两款产品,为下游反转录扩增实验提供了更优的模板保障。
技术参数
特征参数 |
技术参数 |
提取方式 |
磁珠法 |
提取技术 |
纳米磁珠技术 |
样本裂解方式 |
不裂解红细胞,直接上样 |
裂解液组成 |
不含Trziol,苯酚、氯仿、β巯基乙醇、巯基乙醇等有毒有害试剂 |
样本体积 |
1 ml |
洗脱体积 |
70-105 µl |
主要样本类型 |
全血、外周血、骨髓血 |
运行时间 |
70 min/12 samples |
得率 |
≥3 µg/1 ml 血液 (≥95% of all samples processed).
健康人群的白细胞平均水平为 4.8 × 10^6 – 1.1
10^7 leukocytes/ml.
|
总RNA纯度 |
① RNA纯度 1.8-2.2 (A260/A280) ② RNA 中基因组 DNA比例≤2 % (w/w) (≥95% 的处理样本) ③ RNA反转录与未做反转录后的模版,通过ABL内参基因q-PCR扩增的△Ct>5。 |
处理方式 |
配MDx-12提取仪实现全自动提取 |
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