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了解基因电转

来源:仪器批发网2021-08-06 10:46:38浏览:755

  

  CellEasyTM低电压基因电转仪 产品特点
  ❶ 细胞处理量:1x106-1x107个细胞; 
  ❷ 高转染效率和高细胞存活率:辉园苑自主研发的创新型低电压基因电转仪,即在较低的电压下,可产生足够强度的均匀电场,实现细胞的高转染效率及细胞高存活率;(60%以上电转效率,90%以上存活率); 
  ❸ 符合GMP标准耗材:在GMP车间,按GMP标准生产与质检; 
  ❹ 专用电转缓冲液:常规的传染试剂,也可用于我们的电转仪,实现电转仪的广谱性使用,配套我们的电转缓冲液,可显著提高细胞转染率及存活率,更好的保护细胞,达到实验的高效率; 
  ❺ 应用领域:科研方向-多基因筛选,功能基因组筛选;  

  ❻ 合理的设备及耗材成本:相对于脂质体的化学转染和病毒的生物转染,我们转染体系绝对划算,有成本优势。

产品咨询热线:13066324063


      1、转染(transfection)概念

  
  真核细胞主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。
  
  2、转染类型
  
  常用的细胞转染方法主要分为三类途径:物理介导(电穿孔法,基因枪法、显微注射法)、化学介导(脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物介导法)、生物介导(病毒介导转染、原生质体转染)。
  
  01物理介导
  
  ❶ 电穿孔法:短暂高强度脉冲,介导外源基因导入
  
  ❷ 基因枪法:粒子轰击法,氦气或氮气通过压缩,冲击细胞,将携带的外源基因轰入细胞内部
  
  ❸ 显微注射法:管尖极细(0.1至0.5μm)的玻璃微量注射针,将外源基因片段直接注射到原核期胚或培养的细胞中
  
  02化学介导
  
  ❶ 脂质体转染法:脂质体类似于细胞膜结构的化学物质,包裹外源DNA,通过膜融合,介导的胞吞作用
  
  ❷ 磷酸钙共沉淀法:Ca2+离子与DNA可形成复合物沉淀,加入细胞表面,可介导内吞作用进入
  
  ❸ 阳离子聚合物介导法:阳离子聚合物可与DNA的磷酸根通过静电作用结合形成复合物,介导外源基因进入细胞
  
  03生物介导
  
  ❶ 病毒介导转染:通过病毒为媒介,携带外源基因,感染细胞,介导外源基因插入至基因组的方法(慢病毒,腺病毒,灭活仙台病毒)
  
  ❷ 原生质体转染:以原生质体为受体细胞,将目的基因导入受体细胞,使之表达
  
  3、不同转染类型的优劣势分析
  
  
  
  因此,瞬转有化学介质的毒性影响,病毒转染,有潜在的安全影响, 有致瘤的风险,选取一种无毒,安全的转染方法是当前也是以后必然的一种趋势和方向,电转染方法应运而生。
  
  4、电转染原理及其应用
  
  01电转染
  
  是通过短暂的高强度电脉冲作用于细胞,当外加电场强度大于细胞膜穿孔的临界强度,细胞膜上就会出现一过性的、可逆的孔道,外源大分子如DNA、蛋白或抗体等以弥散的方式通过这些孔道直接进入细胞内,或伴随孔道关闭时细胞膜结构重塑以吞饮的方式进入细胞内。
  
  
  02电转原理
  
  ❶ 细胞膜近似绝缘体,细胞附近电转液中电流扭曲;
  
  ❷ 在串联电路中电阻越大分到电压越大,细胞两端电压基本都落在两端细胞膜上
  
  只有一个细胞端面电转有效;
  
  ❸ 细胞质内分到电压很小,DNA电转进入细胞膜后马上停止,后续靠细胞本身机制慢速扩散;
  
  ❹ 细胞核两端电压及其微小,微小的电压又落在核膜上,核内部完全没有电压,电转没有基因毒性。
  
  
  03电转染的应用
  
  电脉冲疗法具有广阔的前景,它是指在电脉冲的作用下,细胞膜的通透性发生改变,细胞产生可逆性或不可逆性电穿孔,利用这种穿孔,导入那些在正常情况下不易通过细胞膜的药物、疫苗、DNA、RNA 及寡核苷酸等物质,或直接使肿瘤细胞发生不可逆性电穿孔而破裂死亡,从而达到治疗目的。
  
  ❶ 电化学疗法:利用高强度的电脉冲引起细胞膜结构改变,使原本不易透过脂质双分子层膜的化疗药物易进入细胞内,将电脉冲与化疗药物相结合治疗肿瘤,可以增强化疗药物对肿瘤细胞的毒性作用,降低化疗药物的全身使用剂量,克服化疗耐药性和肿瘤治疗后再生的问题;
  
  ❷ 电转基因疗法:将电脉冲和基因治疗结合起来,利用电脉冲所致的可逆性穿孔导入 DNA 或 RNA 疫苗,通过 DNA 或 RNA的表达抑制肿瘤的发展,亦称电基因疗法;
  
  ❸ 不可逆性电穿孔:随着电脉冲剂量的增加,细胞膜出现不可恢复的破裂即不可逆性电击穿(irreversible electroporation,IREP)而导致细胞死亡
  
  ❹ 细胞内电处理疗法;
  
  ❺ 细胞电融合技术的应用;
  
  ❻ 蛋白分子电嵌入细胞膜的研究。
  
  5、电转解决的问题
  
  01适用于难转染细胞类型
  
  干细胞、原代细胞、神经细胞、不分化细胞、部分难转染肿瘤细胞。
  
  02缩短实验周期
  
  电转染方法相较于脂质体和病毒转染,大大缩短转染周期,可快速的获取得到实验结果,加快科研进程。
  
  03操作简单
  
  电转染方法操作简单,易上手。
  
  04生物安全性更高
  
  对于科研与临床结合试验来说,脂质体转染有化学毒性,对细胞影响较大,死亡量较高,生物病毒型感染,有潜在的致瘤风险,而物理的电转染法,既可保证转染效率,又可保证生物安全性,成为新一代机具潜力的转染技术应用。
  
  05多体系转染
  
  现阶段研究,多以单基因,寻找明星分子或筛选(测序)获取得到研究的靶标分子,针对单个因素,研究生理生化及其转化转归,作用机制,代谢路径,作用方式等方面,而电转不局限于单个基因的研究,可多体系,多质粒,多功能基因组层次筛选与转染,提高科研层次,开拓科研广度,加大科研深度。

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